1免疫组化分析SIRT1表达
收集患者乳腺癌组织标本及匹配的癌周正常乳腺组织，常规切片，切片脱蜡后过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，抗原修复后加入1：1500的鼠抗人SIRT1一抗（stantacruz公司）孵育过夜。一抗孵育完成后，加入辣根过氧化酶标记的二抗孵育半小时，冲洗干净，加入DAB显色，苏木素复染后进行结果判断。免疫组织化学SP试剂盒检测购自上海博谷生物有限公司。组织标本中的SIRT1表达计算：镜下SIRT1的阳性反应为棕黄色粗颗粒，阳性细胞数数＞70%标记为+++，51%～70%为++，20%～50%标记为+，未见阳性反应或阳性反应细胞＜20%标记为-。每张切片计数不同视野，共计数1000个细胞。采用SPSS13.0统计学软件处理数据，非参数检验采用χ2检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1乳腺患者的SIRT1表达情况
免疫组化可见SIRT1主要定位于细胞质中，阳性表达为棕黄色粗颗粒，极少部分位于细胞核中，染色强弱不等。乳腺癌组织和癌周组织中SIRT1的表达情况如表1所示，结果显示，与癌周正常组织相比，乳腺癌组织中的SIRT1呈现强表达，强阳性表达例数更多，与正常乳腺组织比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2乳腺癌患者的CT检查征象与SIRT1表达的关系
将SIRT1表达为-～+的患者分为低SIRT1表达患者，将++～+++的患者分为高SIRT1患者，低SIRT1表达患者20例，高SIRT1表达25例。χ2分析可见SIRT1表达情况与乳腺癌病灶CT下的形态没有关系；SIRT1表达情况与病灶边缘形态有关，对于高SIRT1表达的患者，边缘毛刺征较为常见；从病灶生长分布形态来看，高SIRT1表的患者，其肿块和浸润弥漫分布的例数较多，肿块型的病灶直径较大。间接征象方面，钙化程度与SIRT1表达无关，SIRT1高表达的患者出现内部坏死的例数较多，更重要的是，高SIRT1表达的患者其腋窝淋巴结转移的例数较多。
3讨论
近年来人民生活水平有所提高，健康意识有所增强，常规体检的普及率得到提高，为乳腺癌的早发现、早诊断、早治疗提供了希望［4］。CT是乳腺检查的常有方法之一，对乳腺肿块与周围组织的关系显示的较为明确，也能显示肿块内部的结构，不仅可以用于发现乳腺病变，还具有一定的鉴别诊断价值［5］。乳腺癌在CT下的征象主要表现为病灶密度增高，高于周围组织，边缘出现毛刺或不规整，可呈现结节状，肿块状和慢慢浸润分布。结节状乳腺癌的直径通常较小，边界也规整，较少见淋巴结转移。肿块状乳腺癌的直径一般较大，边缘多呈毛刺状，常伴有腋窝淋巴结专业和内部坏死。因此可通过这些CT征象判断乳腺癌的患者的病情严重程度。通过对病灶边缘的比较，可以一定程度上区分乳腺癌和良性乳腺增生病变［6-8］。本研究还通过免疫组化分析了乳腺癌患者的SIRT1表达情况，发现与癌周正常组织相比，乳腺癌组织的SIRT1出现了强表达，同时发现，SIRT1的表达水平与乳腺癌患者的重要CT学征象有关，具体来讲，高SIRT1表达乳腺癌患者的病灶边缘多呈毛刺状或不规则状，病灶多呈肿块型和浸润型生长，内部坏死多见，且腋窝淋巴结转移例数多，这些均是乳腺癌患者病情较差，预后不良的因素。因此，我们认为，SIRT1的高表达预示着乳腺癌患者不良的预后，高SIRT1表达可能引起乳腺癌的发生和发展。SIRT1可以使H1、H3和H4组蛋白发生去乙酰化修饰，还可以和许多非组蛋白发生作用，参与细胞的多种生理和病理过程。近年来，大量研究证实SIRT1和肿瘤的发生有关。通常认为SIRT1是一种肿瘤促进因子，多中实体肿瘤和癌细胞株中均能检测到SIRT1的高表达，SIRT1具有维持肿瘤生长，防治肿瘤凋亡的作用［9-10］。有研究指出，在胃癌中，SIRT1的表达率高达70%，且以肿瘤的分期、淋巴节转移及侵袭扩散等生物学行为密切相关［11］。SIRT1的促进或维持肿瘤生长的机制主要通过以下通路：（1）SIRT1-E2F1负反馈调节通路，该通路主要有抑制凋亡的作用。（2）SIRT1-FOXO调节通路，该通路可以暂停细胞周期，给细胞DNA修复的机会，从而延迟细胞寿命。（3）SIRT1-p53通路，SIRT1可以是p53基因发生乙酰化，从而失活，抑制细胞凋亡［9］。在乳腺癌中，已经有研究证实，SIRT1起着肿瘤促进因子的作用，本研究的结果与既往研究抑制。我们认为，真是SIRT1的促瘤作用，使得高表达SIRT1患者的乳腺癌病灶更大，浸润能力更强，生长更快，从而出现更多的坏死和淋巴结转移征象。总之，本研究认为，乳腺癌患者的CT检查征象与SIRT1表达有关，二者联合诊断乳腺癌的前景广阔。
作者：马雄伟 彭荣杰 陈勇