OSF1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性

本文作者：康东红；王燕；张洪美；冯潇雨；曹维；王萍；成功正常投稿发表论文到《生物工程学报》2014年02期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：为了研究人成骨细胞刺激因子(Humanosteoblast-stimulatingfactor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K/osf-1,线性化后电转化酵母宿主菌GS115,构建P.pastorisGS115/pPIC9K/osf-1,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃,经1%的甲醇诱导表达96h,重组蛋白的表达量达到最大。经SDS-PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18kDa,与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP-SephadexC-50离子交换层析进行纯化,得到纯度达98%以上的OSF-1。Westernblotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的OSF-1能促进鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF-1,为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。
【论文正文预览】：随着社会人口老龄化,骨质疏松(Osteoporosis,OP)已成为世界范围内危害人类健康的日趋严重的医疗问题和社会问题。目前抗OP的药物分为抑制骨吸收和刺激骨形成两大类,但尚不能完全解决OP骨折这一棘手的问题。骨质量由骨小梁的数量和其最佳立体构象所决定。虽然促进骨形成和抑制
【文章分类号】：R580;Q78
【稿件关键词】：OSF-毕赤酵母蛋白表达纯化生物活性
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【稿件标题】：OSF1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性
【作者单位】：山东大学附属千佛山医院;
【发表期刊期数】：《生物工程学报》2014年02期
【期刊简介】：《生物工程学报》杂志是由中华人民共和国新闻出版总署、正式批准公开发行的优秀期刊，生物工程学报杂志具有正规的双刊号，其中国内统一刊号：CN11-1998/Q，国际刊号：ISSN1000-3061。生物工程学报杂志社由中国科学院主管、主办，本刊为月刊。自创刊以来，被公......更多生物工程学报杂志社(http://www.400qikan.com/qk/5081/)投稿信息
【版权所有人】：康东红；王燕；张洪美；冯潇雨；曹维；王萍；

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