结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构

本文作者：李武；邓光存；刘晓明；王玉炯；成功正常投稿发表论文到《生物工程学报》2014年02期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGHpA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internalribosomeentrysite,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGHpA,使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK293T细胞中进行体外表达实验,48h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Westernblotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK293T中得到表达,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。
【论文正文预览】：结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)引起的慢性致死性人兽共患性传染病。据世界卫生组织估计,全世界大约有1/3的人群感染MTB。近年来,随着多重耐药性菌株的不断出现,MTB与艾滋病共感染等情况更加剧了全球结核病负担[1-2]。我国是世界上
【文章分类号】：R378;S852.61
【稿件关键词】：结核分枝杆菌优势抗原共表达蛋白免疫印迹
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【稿件标题】：结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达
【作者单位】：宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室;
【发表期刊期数】：《生物工程学报》2014年02期
【期刊简介】：《生物工程学报》杂志是由中华人民共和国新闻出版总署、正式批准公开发行的优秀期刊，生物工程学报杂志具有正规的双刊号，其中国内统一刊号：CN11-1998/Q，国际刊号：ISSN1000-3061。生物工程学报杂志社由中国科学院主管、主办，本刊为月刊。自创刊以来，被公......更多生物工程学报杂志社(http://www.400qikan.com/qk/5081/)投稿信息
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