【toll样受体信号通路】人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定

时间：2015-02-07 12:20:50 作者：杨再兴；梁艳；李畅；

本文作者：杨再兴；梁艳；李畅；曾贤铭；朱烨；仲人前；成功正常投稿发表论文到《中华检验医学杂志》2007年10期,引用请注明来源400期刊网！

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【摘要】：目的建立检测人Toll样受体3(TLR3)mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平。方法用BeaconDesigner2.1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针,逆转录扩增目的片段,构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品。在ABIPrism7000型荧光定量分析仪上,通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,建立标准曲线;并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者,20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMCTLR3基因的荧光强度,根据标准曲线及循环阈值,由软件自动计算样本中TLR3mRNA的起始拷贝数。结果FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为10~2～10~8拷贝数/μlRNA(r=-0.9974),内参β-actin的线性范围为10~3～10~8拷贝数/μlRNA(r=-0.9984);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为6.7%和8.7%,低浓度样本批内及批间CV分别为12.3%和14.0%,30名健康人,20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3mRNA的表达,分别为3.46×10~2～4.51×10~3拷贝/μgRNA、4.92×10~2～1.42×10~4拷贝/μgRNA和2.58×10~2～7.17×10~3拷贝/μgRNA。结论成功建立检测TLR3mRNA的FQ-RT-PCR方法,可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具。
【论文正文预览】：Toll样受体3(TLR3)是TLR家族的重要成员,主要表达于胎盘、胰腺、肺、肝、心脏和皮肤角化组织或细胞中〔’“」,在树突状细胞(Dc)和肠上皮细胞中也可检测到TLR3的表达。TLR3是病毒双链RNA(dsRNA)的模式识别受体(PRR),在宿主抗病毒感染中发挥极为重要的作用。近期研究表明,TLR3
【文章分类号】：R450
【稿件关键词】：Toll样受体单个核细胞聚合酶链反应
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【稿件标题】：【toll样受体信号通路】人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定
【作者单位】：第二军医大学长征医院实验诊断科
【发表期刊期数】：《中华检验医学杂志》2007年10期
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