【组织型纤溶酶原激活剂】人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达

时间：2015-04-08 11:41:38 作者：任芳；张青云；王雅明

本文作者：任芳；张青云；王雅明；徐建军；成功正常投稿发表论文到《中华检验医学杂志》2007年11期,引用请注明来源400期刊网！

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【摘要】：目的克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人PAI1的单克隆抗体,以检测PAI1在乳腺癌中的表达。方法利用逆转录(RT)-PCR方法从人乳腺癌细胞株MDA231总RNA中扩增克隆PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达MS2-PAI1融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫BALB/C小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体。利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析PAI1在乳腺癌中的表达水平。结果克隆了1209bp的PAI1基因全长片段。经ELISA双筛,获得2株能稳定分泌抗PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为IgG1,且均能特异识别PAI1,并与其他蛋白无交叉反应。Wb结果显示,该抗PAI1单抗与MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合。免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应。结论克隆了人PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对PAI1的单克隆抗体。初步检测PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的PAI1奠定了可靠基础。
【论文正文预览】：纤溶酶原激活物抑制物一1(PA川是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员,为379个氨基酸组成的单链糖蛋白,相对分子质量大约54000〔‘1,被认为是尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase一typeplasminogenaetivator,uPA)和组织型纤溶酶原激活物(tissue一typeplasminogenaetivator,tpA)
【文章分类号】：R737.9
【稿件关键词】：抗体单克隆肿瘤人纤溶酶原激活物抑制物-
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【稿件标题】：【组织型纤溶酶原激活剂】人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用
【作者单位】：北京大学临床肿瘤医院
【发表期刊期数】：《中华检验医学杂志》2007年11期
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